Введение вектора в клетку

Клетка-реципиент—эта та среда, в которой может функционировать рекомбинантная ДНК в виде вектора. Такие клетки называют пермиссивными. К ним предъявляют следующие требования:

· не разрушаются чужеродной ДНК или РНК собственными ферментам;

· срабатывает механизм репликации вектора;

· проявляется выраженная активность промотера и/или терминатора транскрипции р-ДНК;

· отмечается полный сплайсиг м-РНК ;

· наблюдается эффективная трансляция м-РНК;

· нет выраженной активности пептидогидролаз, катализирующих реакций гидролиза экспрессируемых чужеродных белков.

Часто в качестве пермиссивных клеток используют Е. coli, Bacillus subtilis, В. stearothermophilus, В. brevis, Saccharomyces cerevisiae.

Для включения вектора в пермессивные клетки используют различные методы: трансформация, инфекция, микроинъекция.

Клетки, способные адсорбировать и поглощать вектор, называют компетентными. У таких клеток изменены свойства клеточной стенки: снижен поверхностный заряд и повышена чувствительность к осмотическому шоку.

Компетентность клеток можно повысить, используя соли кальциялибо совместно соли кальция, магния, рубидия. Кроме того, применяют глубокое замораживание и оттаивание, а также электропорацию (кратковременное воздействие электрического поля высокой напряженности, которое вызывает разрушение цитоплазматической мембраны с образованием пор).


Прочие статьи:

Измерение поверхностного натяжения. Равновесное поверхностное натяжение
К простым способам измерения поверхностного натяжения относится метод кольца дю Нуи. Платиновое кольцо притапливают в жидкости, и измеряется сила, необходимая для вытягивания кольца через поверхность. Вместо кольца можно использовать плат ...

Ранняя эволюция птиц
С точки зрения современной науки, ранняя эволюция птиц выглядит очень запутанной и сложной. Диверсификация, или эволюционное разделение на множество разнообразных форм, началось в меловом периоде. Многие из этих форм, в том числе и предки ...

Лук-Порей — Allium Porrum
Использование. В растениях содержится около 3% белков, до 12% углеводов, ряд минеральных солей и витаминов. Важным свойством порея является то, что во время зимнего хранения в отбеленном ложном стебле происходит не уменьшение, а значите ...