Выделение хромосом

В ходе описываемых процедур для предотвращения потерь и поломок хромосом, для обеспечения температурного режима необходимо использовать пластиковые пипетки и пробирки. Клетки блокируют на стадии митоза, митотические хромосомы высвобождают воздействием гипотонического шока и гомогенизацией. Хромосомы очищают дифференциальным центрифугированием.

Таблица. Исходные растворы на CMGT

Среда для роста клеток и селективная среда

NB. Трансфекцию необходимо проводить в средах с небольшим содержанием фосфатов, таких, как DMEM. Клетки, растущие в средах, обогащенных фосфатами, непосредственно перед проведением трансфекции пересейте на среду, бедную фосфатами. Среды, обогащенные фосфатами, можно использовать при глицериновом шоке

Гипотонический раствор

10 мМ Hepes 3 мМ хлорида кальция

Раствор для трансфекции

25 мМ Hepes 134 мМ хлорида натрия 5 мМ хлорида калия 0,7 мМ дигидрофосфата натрия 5 мМ глюкозы

1,25 М хлорида кальция Раствор для отмывки

25 мМ Hepes 134 мМ хлорида натрия

5 мМ хлорида калия

0,7 мМ дигидрофосфата натрия


Прочие статьи:

Естествознание - фундаментальная наука
Учись мой сын, наука сокращает нам опыты быстротекущей жизни. А. С. Пушкин Естествознание — это совокупность наук о природе, которые изучают мир в его естественном состоянии. Это обширная область человеческих знаний о природе: разнообра ...

Генетика и развитие циркадианных ритмов беспозвоночных
Созревание колебателя и наблюдаемых ритмов Настоящая глава охватывает процесс созревания в ходе онтогенеза и генетику ведущего осциллятора и наблюдаемых (ведомых) ритмов у беспозвоночных. Обсуждение в основном ограничено многоклеточными ...

ДНК-рестриктазы и ДНК-метилазы
Это ферменты, впервые открытые как часть системы рестрикции- модификации ДНК у бактерий, специфически гидролизуют молекулы двухцепочечных ДНК при наличии в них определенных последовательностей нуклеотидов, называемых сайтами рестрикции. ...